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LightSpeed 超快速限制性内切酶 SmaI
产品编号 : HTNP1053
描述 :
规格 : 100T
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HTNP1053 100T
¥225.00

产品简介

5'...C C C G G G...3'

3'...G G G C C C...5'

 

LightSpeed 系列超快速内切酶是一系列经过基因工程重组、快速、精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒 DNAPCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightSpeed系列超快速内切酶具有如下特点:5-15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 EZ 酶切 Buffer中具有 100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。

 

储存条件:-20℃有效期至少一年

 

产品组成:

组分

规格

LightSpeed 系列 SmaI

 

100μL

10× EZ Buffer

 

1mL

10× EZ Color Buffer

 

1mL

 

使用方法:

1. DNA 快速酶切流程

①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

名称

质粒DNA

PCR产物

基因组DNA

ddH2O

15μL

 

16μL

 

30μL

 

10× EZ Buffffer 10× EZ Color Buffffer

 

2μL

 

3μL

 

5μL

 

底物 DNA

 

2μL (up to 1μg)

 

10μL (0.2μg)

 

10μL (5μg)

 

LightSpeed 系列 SmaI

 

1μL

 

1μL

 

5μL

 

Total

 

20μL

 

30μL

 

50μL

 

注:本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× EZ Buffer 加入量可适当减少至 2μL。但由于 DNA 聚合酶 同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

 

 

②轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

37℃温育 15分钟(质粒),或 15-30 分钟(PCR 产物),或 30-60 分钟(基因组 DNA);

注:37℃反应时酶活性会略降低,需适当延长温育时间。

80℃温育 20分钟即可使酶失活,停止反应(可选)。

 

2. 双酶切或多酶切

①每种快速内切酶的用量为 1μL,并根据需要适当扩大反应体系;

②所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10

③如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

 

3. 适用于质粒的扩大反应体系

DNA

 

1μg

 

3μg

4μg

5μg

 

2μg

 

3μg

 

4μg

 

5μg

 

LightSpeed 系列 SmaI

 

1μL

 

2μL

 

3μL

 

4μL

 

5μL

 

10× EZ Buffffer 10× EZ Color Buffffer

 

2μL

 

2μL

 

3μL

 

4μL

 

5μL

 

Total

 

20μL

 

20μL

 

30μL

 

40μL

 

50μL

 

注:如果总反应体系大于 20μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

 

注意事项

1.内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存;

2.甘油含量大于5%,低盐浓度,pH>8.0或酶大大过量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切;

3.本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途;

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

COA
MSDS
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说明书
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